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===5-AMP活化蛋白激酶(AMPK)是细胞内能量平衡的关键传感器。AMPK响应于AMP/ATP比值的增加而激活,AMP/ATP比值可由肌肉收缩、饥饿或缺氧等多种因素引起。AMPK是包含α和(- 63 kDa)和β;-(38 kDa)和γ-(38 kDa)亚基的异三聚体蛋白复合物。对于每个亚单位,已经鉴定出亚型(α,1,α;2,和β;1,和β;2,和γ;1,和γ;2,和γ;3),理论上允许形成12种不同的蛋白质。α和亚基含有丝氨酸/苏氨酸激酶结构域,调节亚基包含AMP和ATP(和γ;亚基)的结合位点和糖原(和β;亚基)。AMPK通过催化域内的THR -172磷酸化而激活。AMP结合导致AMPK活性增加2至5倍,与基础水平相比。AMP与γ和亚基的结合导致激酶的变构激活,并诱导激酶域的构象变化,其保护AMPK免受THE-172的去磷酸化。AMPK磷酸化测定试剂盒测量全细胞磷酸化AMPK,并将信号归一化为总蛋白含量。抗体识别两个和α亚基,因此可以用于来自所有组织(人、小鼠、大鼠)的细胞。这种简单而有效的检测消除了细胞裂解物制备的需要,并且可以用于研究AMPK调节在短期和长期测定中。在该实验中,在96孔板中生长的细胞在威尔斯中固定和渗透。AMPK磷酸化(PAMPK)是用荧光ELISA测量的,然后在每个孔中进行总蛋白测量。
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